水質環(huán)境監(jiān)測中微生物檢測的質量控制研究！

　　水質環(huán)境監(jiān)測在防治水污染、制定水環(huán)境標準方面發(fā)揮重要作用。水質監(jiān)測質量保證是一種保證監(jiān)測數(shù)據(jù)準確可靠的手段，是整個監(jiān)測過程的重要環(huán)節(jié)。在水質環(huán)境監(jiān)測中，水中微生物的檢測是一項重要內容。本文從水質監(jiān)測微生物樣品采集、實驗室檢測系統(tǒng)、水質微生物樣品檢測中、結果評價系統(tǒng)等方面對水質環(huán)境監(jiān)測中微生物檢測的質量控制進行了論述分析，以供相關從業(yè)人員借鑒參考。

　　水質監(jiān)測過程中，水中微生物在實驗室的檢測存在一些特別的問題，諸如在分析標準，已知加入量、參比樣品等，通常都不具備或不知道，因此個人判斷常常顯得更為必要。一個有效的質量保證程序必須能控制從采樣到報告數(shù)據(jù)過程中所有足以影響檢驗結果的因素，這些因素包括采樣技術、實驗設備與器材、工作人員、材料供應的品質、培養(yǎng)基、分析測試步驟等等。以下就水質環(huán)境監(jiān)測中微生物檢測的質量控制進行簡要分析。

　　一、水質監(jiān)測微生物樣品采集的質量控制

　　1、水質監(jiān)測微生物實驗室先備齊采集微生物樣品的無菌采樣玻璃瓶

　　許多水體隨時間和空間會發(fā)生很大變化，必須制定出合理的采樣規(guī)劃。為保證采集的水樣必須有代表性，采樣時固定取水點，同一時間；采水量應為瓶容量的80%，以便在檢驗時充分混勻；采樣時應直接采集，不得用水樣刷洗已滅菌的采樣瓶，并避免手指和其他物品對瓶口的玷污；采樣時不可攪動水底的沉積物；采集管網(wǎng)水的樣品前應對水龍頭進行消毒，方法為用火焰在龍頭表面燒灼片刻（3～5秒），而后放水5～10分鐘。農村生活用水部分水樣為蓄水池，需要備一個干凈的水桶，放入水池中數(shù)分鐘，盡量不取表面水，提水后將水灌入無菌瓶中，手注意不要接觸到無菌瓶口和瓶塞。

　　2、水樣的保存達到減緩微生物繁殖的作用

　　采用低溫冷藏箱來保存水樣，水樣全部采集后立即送回實驗室；在運輸中，玻璃容器要防止破裂，須有固定措施，防止樣品容器傾倒和樣品溢出。

　　二、實驗室檢測系統(tǒng)的質量控制

　　1、主要實驗設備控制

　　（1）溫度計或其它溫度計量一起每半年校對一次，以保證培養(yǎng)箱、冰箱、冷凍箱和干燥箱都能連續(xù)準確的反映操作溫度。

　?。?）天平的使用應嚴格遵守操作規(guī)程，定期進行檢定。

　　（3）使用PH計，至少要配制兩種標準緩沖液（PH4.0，PH7.0或PH10）來校準PH計。

　?。?）分析用水最好采用去離子水或蒸餾水，反對使用滲透水。

　?。?）電熱滅菌箱應定期（三個月）采用孢子試條或孢子懸浮液來測試其性能，確保操作準確顯示在160℃～180℃之間，己滅菌的器皿應有標志區(qū)分。

　?。?）高壓滅菌器也應定期采用孢子試跳或孢予懸浮液檢驗其滅菌效果，每次使用要記錄好溫度、氣壓和滅菌時間。

　　（7）膜濾裝置在使用前應將部件組合起來，并檢查有無滲漏，必要時覆以硅酮，以增強過濾排放的效果。使用應徹底清洗。

　?。?）紫外燈應每月定期擦試，每三個月一次使用紫外光度計測量紫外燈，以保持能使用紫外燈放出的紫外光在其最初放出的70%以上。

　　（9）培養(yǎng)箱應每天兩次檢查其使用溫度，培養(yǎng)箱應置于室溫為16℃-27℃范圍的房間最佳。

　?。?0）所使用的玻璃器具要求完整無損，清洗后要進行檢查，如果洗后表面有過多水珠附著，必須重洗。對于一種新的洗滌劑，使用前應先檢驗其是否會留下對生物有抑制性的殘留物。必要時采用溴麝香草酚蘭或其它指示劑抽樣進行PH反應試驗。

　　2、實驗室環(huán)境控制

　?。?）實驗室要求有良好的通風而且能夠避免灰塵、溫度變化，最終好能要用集中式空調，這樣一來即能減少雜菌污染，又能保證培養(yǎng)箱的穩(wěn)定操作和減輕培養(yǎng)基、分析天平的受潮問題。

　?。?）設計實驗室，以要工作時使往來通行和訪客的影響能減少到最小程序為原則，并要具專門的區(qū)域供配制培養(yǎng)基和無菌操作用。

　?。?）用光滑的最后一道漆覆蓋墻壁，使之易于清洗和消毒，地面要求使指定的材料，做到放滲水、光滑、易于清潔；工作臺高寬適當、臺面要做到防止透水、抗腐蝕、光滑無逢。

　?。?）保持高度標準的清潔空氣。可采用RODAC平皿、細菌密度平皿或拭抹法來監(jiān)測空氣和臺桌面。

　　3、對制成的培養(yǎng)基的質量控制

　　每次配制好的培養(yǎng)基應記錄有配制人，配制日期，培養(yǎng)基名稱和配制批次、數(shù)量、滅菌溫度和所使用時間、PH值以及培養(yǎng)基中是否配有不穩(wěn)定成分等。并進行無菌檢驗及陽性的陰性對照培養(yǎng)檢查。

　　三、水質微生物樣品檢測中的質量控制

　　微生物水樣采集后送至水質檢測室，檢驗中所用的一切用品必須是完全滅菌的，在滅菌前應徹底洗滌干凈。培養(yǎng)基和稀釋液按規(guī)定要求進行高壓蒸汽滅菌。

　　1、檢測菌落總數(shù)的質量控制

　　在接種前應將水樣充分搖勻，使水中的細菌均勻分布于水中，水樣稀釋時應小心沿管壁加入，不要觸及管內稀釋液，以防吸管尖外側部分粘附的檢液混入其中，將水樣注入皿內時，從皿側加入，不要揭去皿蓋，最后將吸管直立使水流空，并在皿底干燥處再擦一下吸管尖將余液排出，而不要吹出。為防止產生片狀菌落，水樣加入平皿后，在20分鐘內向皿內傾入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即混合均勻，皿內瓊脂凝固后，不要放置長久后才翻轉培養(yǎng)，而應于瓊脂凝固后，在數(shù)分鐘內將平皿翻轉進行培養(yǎng)，這樣可避免菌落蔓延生長。

　　2、檢測大腸菌群的質量控制

　　接種后搖動試管，使水樣與乳糖發(fā)酵管混勻；乳糖發(fā)酵試驗中常有產氣量少或產酸不產氣的情況，有時倒管內雖無氣體，但在液面及管壁卻可以看到緩緩上浮的小氣泡，這時不要放棄，繼續(xù)做下一步證實實驗。初發(fā)酵陽性則需進一步革蘭染色和繼續(xù)接種培養(yǎng)觀察。挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率有密切關系，一定要挑取典型菌落，如無應多挑幾個以防假陰性。

　　四、結果評價系統(tǒng)的質量控制

　　1、操作方法的精密度的度量

　?。?）從某一特種型式的一批水樣中，選出最先15個陽性水樣，做雙樣分析。

　　（2）計算每個數(shù)據(jù)的對數(shù)，如果在任何一雙樣結果中有任一者為零，則都加1然后算對數(shù)值。

　?。?）計算每個一雙對數(shù)的差城（用R表示），并且計算出這些差城的平均值（R）。

　?。?）然后，取例行水樣中的10%，做雙樣分析。如果計算它們的差大于3.27R，則表示化驗員的精密度失控制，這時就應該否定自從上一次精密度檢查后的分析結構。找出原因，方可繼續(xù)分析。

　　2、無菌性檢查

　?。?）每做一次試驗，就必須用滅菌水為水樣，檢查培養(yǎng)基、濾膜、稀釋水、沖洗用水、玻璃器皿和器具的無菌性，如果有雜菌侵染，則用該材料做試驗所得的數(shù)據(jù)應該否定。

　?。?）每次試驗至少要對一個水樣做重復分析，原則上要對10%的水樣做出重復分析。

　?。?）對多人操作的實驗室，應進行對至少一個陽性水樣的平行分析，以便比較操作。

　　近年來水質環(huán)境監(jiān)測已經取得一定成績，常規(guī)監(jiān)測日趨成熟，水質自動監(jiān)測正有計劃地逐步開展。我國水環(huán)境監(jiān)測方法可以歸為三類：自動監(jiān)測，常規(guī)監(jiān)測，應急監(jiān)測，而水質環(huán)境監(jiān)測中水中微生物的檢測是其重要內容，因此對其檢測質量控制研究具有重要的現(xiàn)實意義。